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偶氮萃取柱的操作問題解析

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   偶氮萃取柱的操作問題解析
  1.裝柱
  柱子下的活塞避免使用潤滑劑,以免被淋洗劑帶到產品中。干法和濕法裝柱區(qū)別較小,只要能把柱子裝實即可。裝柱前應仔細觀察固相萃取柱是否開裂,避免影響分離效果,裝柱應該要適度緊密(太緊密淋洗劑流速太慢,太疏松淋洗劑流速過快)、均勻(避免樣品從一側斜著流出),避免過柱時出現(xiàn)大量的氣泡。
  2.加樣
  用少量的溶劑溶樣品加樣,打開活塞,待溶劑層下降至石英砂面時,再加少量的低極性溶劑,然后再打開活塞,如此三次,一般石英變成白色。加入淋洗劑后不可立即加壓,等溶樣品的溶劑和樣品層有分開2-4cm,再加壓,這樣可以避免溶劑夾帶樣品快速下行。
  3.樣品的收集
  用硅膠作固定相過柱子的原理是一個吸附與解吸的平衡過程。如果樣品與硅膠的吸附較強,樣品解析較慢。這樣就會出現(xiàn)后面的點先出,而前面的點后出的現(xiàn)象,這時可以采用氧化鋁作固定相。另外,收集的試管大小要以樣品量而定,特別是小量樣品,如果用大試管,可能一根就收到了多個樣品,如果都用小試管,缺點是工作量太大。
  4.后處理
  偶氮萃取柱分離后,由于使用了大量的溶劑,其中的雜質也會積累到所需組分中,必要時進行重結晶。另外,過柱時有時會出現(xiàn)氣泡,這可能存在兩種原因:這與使用的溶劑類型有關,如果是易揮發(fā)的溶劑,如二氯甲烷等,在室溫稍高的情況下,很容易出現(xiàn)這種現(xiàn)象。因此,在室溫高的時候,應該選擇沸點較高,揮發(fā)性相對小的溶劑。
  偶氮萃取柱的清洗:
  以5ml適當極性的溶劑洗脫吸附樣品的萃取柱(常用的有純水,緩沖液,水/有機溶劑混合液);
  以5ml適當非極性的溶劑洗脫吸附樣品的萃取柱;
  以5ml去離子水/或低離子強度的緩沖液淋洗萃取柱。

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